Western blot

El Western blot, inmunoblot o electrotransferencia, es una técnica analítica usada en biología celular y molecular para identificar proteínas específicas en una mezcla compleja de proteínas, tal como la que se presenta en extractos celulares o de tejidos. La técnica utiliza tres etapas para lograr esto: separación por tamaño, transferencia a un soporte sólido y, finalmente, visualización mediante la marcación de proteínas con el uso de anticuerpos primarios o secundarios apropiados.^[1]​

Esta técnica es hoy en día imprescindible en varios campos de la biología, como la biología molecular, la bioquímica, la biotecnología o la inmunología.

Mediante una electroforesis en gel se separan las proteínas atendiendo al criterio que se desee: peso molecular, estructura, hidrofobicidad, etc. Hay casi tantas posibilidades como tipos de electroforesis existen. Luego son transferidas a una membrana adsorbente (típicamente de nitrocelulosa o de PVDF) para poder buscar la proteína de interés con anticuerpos específicos contra ella. Finalmente, se detecta la unión antígeno-anticuerpo por actividad enzimática o fluorescencia, entre otros métodos. De esta misma forma se puede estudiar la presencia de la proteína en el extracto y analizar su cantidad relativa respecto a las otras proteínas.^[2]​^[3]​

La técnica «Western blot» fue desarrollada en la Universidad de Stanford. El nombre (Western, occidental en inglés) le fue dado por W. Neal Burnette, y consiste en un juego de palabras con una técnica análoga pero que usa ADN, el Southern (sureño en inglés) blot, que en este caso debe su nombre a su descubridor, Edwin Southern. Otras técnicas que fueron nombradas siguiendo este criterio son el Northern (norteño en inglés) (en el que se separa e identifica ARN), el Eastern (oriental en inglés) blot y el Southwestern (del suroeste en inglés) blot.^[2]​^[4]​

1. ↑ Mahmood, Tahrin; Yang, Ping-Chang (septiembre de 2012). «Western Blot: Technique, Theory, and Trouble Shooting» [Western blot: Técnica, teoría y solución de problemas]. N Am J Med Sci (en inglés) (Canadá: Medknow Publications) 4 (9): 429-434. PMID 23050259. doi:10.4103/1947-2714.100998. Consultado el 22 de diciembre de 2016. 
2. ↑ ^{a b} Renart, Jaime; Reiser, Jakob; Stark, George R (julio de 1979). «Transfer of proteins from gels to diazobenzyloxymethyl-paper and detection with antisera: a method for studying antibody specificity and antigen structure» [Transferencia de proteínas desde geles a papel de diazobenciloximetil y detección con antisuero: un método para estudiar la especificidad de anticuerpos y estructura antigénica]. Proc Natl Acad Sci U S A (en inglés) 76 (7): 3116-3120. PMID 91164. doi:10.1073/pnas.76.7.3116. Consultado el 22 de diciembre de 2016. 
3. ↑ Towbin, Harry; Staehelin, Theophil; Gordon, Julian (septiembre de 1979). «Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications» [Transferencia electroforética de proteínas desde geles de poliacrilamida a capas de nitrocelulosa: procedimiento y algunas aplicaciones]. Proc Natl Acad Sci U S A (en inglés) 76 (9): 4350-4354. PMID 388439. doi:10.1073/pnas.76.9.4350. Consultado el 22 de diciembre de 2016. 
4. ↑ Burnette, Harry W (abril de1981). «'Western blotting': electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate — polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A» [Westernblot: transferencia electroforética de proteínas desde geles de poliacrilamida con dodecilsulfato sódico a nitrocelulosa no modificada y detección radiográfica con anticuerpos y proteína A radioionizada]. Analytical Biochemistry (United States: Academic Press) 112 (2): 195-203. ISSN 0003-2697. PMID 6266278. doi:10.1016/0003-2697(81)90281-5. Consultado el 22 de diciembre de 2016.