L'isolement reproductif ou barrière reproductive désigne tout mécanisme empêchant — ou limitant fortement — l'hybridation de deux espèces habitant la même région, même lorsqu'elles sont étroitement apparentées.
On doit à Theodosius Dobjansky[1] une tentative de classification de ces processus. Un premier niveau distingue les mécanismes qui font barrière à l'accouplement (mécanismes précopulatoires) ou à la fécondation (mécanismes prézygotiques) de ceux qui, intervenant après la fécondation, réduisent la viabilité ou la fertilité des œufs fécondés ou des individus hybrides qui en sont issus (mécanismes postcopulatoires ou postzygotiques).
Selon Ernst Mayr, le concept d'isolement reproductif est un critère essentiel pour la définition biologique d'une espèce, et sa réalité objective, au cours de l'évolution[2].