La ligne de Prusse-Orientale (en allemand : Preußische Ostbahn ; en polonais : Pruska Kolej Wschodnia), également appelée ligne orientale (Ostbahn) en abrégé, était une ligne de chemin de fer d'État de la Prusse qui reliait Berlin, la capitale, à la province de Prusse-Orientale au long des 740 kilomètres jusqu'à la frontière de l'Empire russe près d'Eydtkuhnen, nom allemand de Tchernychevskoïe qui se situe à l'actuelle frontière entre l'oblast de Kaliningrad et la Lituanie. Depuis que la frontière Oder-Neisse et l'oblast de Kaliningrad furent établis à la suite de la conférence de Potsdam en 1945, la ligne est partagée entre les réseaux ferroviaires en Allemagne, en Pologne et en Russie.